【摘要】目的探讨CD25表达与急性髓细胞白血病（AML）患者预后的关系。方法选择2015年6月至2017年6月在宁波市第一医院初诊的AML患者167例。采用流式细胞术检测患者髓细胞CD25免疫表型。其中髓细胞CD25+患者26例，CD25-患者141例。观察并比较CD25+患者与CD25-患者初发时外周血WBC、PLT及骨髓原始细胞比例；首次诱导完全缓解、1年无病生存、1年总体生存情况。分析CD25+患者FMS样的酪氨酸激酶3-近膜区的内部串联重复（FLT3-ITD）基因突变、复杂/高危核型与预后的关系。结果CD25+患者与CD25-患者初发时外周血WBC、PLT比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；CD25+患者骨髓原始细胞比例高于CD25-患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。CD25+患者首次诱导完全缓解率、1年无病生存率、1年总体生存率均低于CD25-患者（42.3%比80.1%、29.2%比65.9%、36.4%比77.1%，均P＜0.05）。CD25+患者中，FLT3-ITD基因突变的患者与无FLT3-ITD基因突变的患者及复杂/高危核型的患者与正常/良好核型的患者0.5年无病生存率和1年总体生存率比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论CD25表达与AML患者预后不良有关。

【关键词】急性髓细胞白血病；CD25；流式细胞术；预后

急性髓细胞白血病（acutemyelogenousleukemia，AML）是一组具有生物学多样性特征的恶性血液肿瘤，临床表现和转归异质性大，依据细胞遗传学及分子生物学改变进行的患者危险分层对临床处置有重要指导作用。其中复杂、高危染色体核型和不良的分子遗传学改变如Fms样络氨酸激酶3（Fms-liketyrosinekinase，FLT3）是目前公认的不良因素[1-2]，对白血病预后有独立指导作用。CD25是IL-2的受体α链（IL-2Rα），表达于正常人静止的T淋巴细胞表面，诱导T细胞的增殖和分化[3]。淋巴细胞激活后，受体脱落形成血清可溶性IL-2R（sCD25）。有学者指出，sCD25水平在急性白血病患者的疗效评估和预后判断上具有临床意义，白血病类型涵盖AML和急性淋巴细胞白血病（acutelymphoblasticleukemia，ALL），sCD25可能参与急性白血病的发生、发展[4]。血清中如此，细胞膜上表达的CD25临床意义如何呢？研究发现，CD25在白血病干细胞（1eukemiastemcells，LSC）细胞膜上的表达率显著高于造血干细胞（hematopoieticstemcells，HSC）[5]；CD25+LSC种植于小鼠骨髓内，从而逃避化疗药物，CD25或可作为抗化疗药物作用LSC的靶点；在费城染色体阳性的急性B淋巴细胞白血病（Philadelphiachromosome+B-ALL，Ph+B-ALL）患儿中，CD25的表达提示不良预后[6]。基于此，本研究就CD25表达与AML患者预后的关系作进一步分析。

1对象和方法

1.1对象选择2015年6月至2017年6月在宁波市第一医院初诊的AML患者167例。患者在治疗前均行细胞形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学检查。其中髓细胞CD25+患者26例，CD25-患者141例。CD25+患者男16例，女10例；年龄29~62岁，中位年龄33岁；FAB分型M0型1例，M1型1例，M2型5例，M4型10例，M5型8例，M6型1例，M7型0例；FMS样的酪氨酸激酶3-近膜区的内部串联重复（Fms-liketyrosineki－nase3-internaltandemduplications，FLT3-ITD）基因突变9例，复杂核型6例，高危核型4例。CD25-患者男74例，女67例；年龄16~57岁，中位年龄39岁；FAB分型M0型0例，M1型2例,M2型18例，M4型60例，M5型57例，M6型2例，M7型2例；FLT3-ITD基因突变25例，复杂核型23例，高危核型15例。两者基线资料比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。患者诱导方案采用标准蒽环类+阿糖胞苷（3+7）方案，MA方案（米托蒽琨10mg/dd1~3，阿糖胞苷150~200mg/dd1~7），IA方案（去甲氧柔红霉素10mg/dd1~3，阿糖胞苷150~200mg/dd1~7）。本研究经医院医学伦理委员会批准。1.2方法采用流式细胞术检测患者髓细胞免疫表型。采集患者骨髓2ml加入EDTA抗凝管中，充分混匀，取EDTA抗凝骨髓液500μl，加入数只流式细胞仪专用的检测管中，免疫表型标记单克隆抗体CD25为美国BD公司产品。将各色荧光单克隆抗体置于流式管中，标记抗体后，将各流式检测管充分振荡混匀，室温避光放置30min，使抗体与细胞发生充分的反应。加入150μl溶血素充分混匀，避光静置孵育，待溶液透亮无絮状沉淀，加PBS离心弃上清液。用300μl的PBS缓冲液重悬细胞，加入100μl3%中性甲醛固定液后上流式细胞仪（美国BD公司）检测。单克隆抗体表达大于同型对照的20％为阳性。1.3观察指标患者随访8~20个月，中位随访时间14个月。观察并比较CD25+患者与CD25-患者初发时外周血WBC、PLT及骨髓原始细胞比例；首次诱导完全缓解、1年无病生存、1年总体生存情况。分析CD25+患者FLT3-ITD基因突变、复杂/高危核型与预后的关系。1.4统计学处理采用SPSS13.0统计软件。计量资料以表示，组间比较采用两独立样本t检验；计数资料以频数和构成比表示，组间比较采用χ2检验；采用Ka－plan-Meier法绘制生存曲线，生存曲线的比较采用log-rank检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1CD25+患者与CD25-患者初发时外周血WBC、PLT及骨髓原始细胞比例比较CD25+患者与CD25-患者初发时外周血WBC、PLT比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；CD25+患者骨髓原始细胞比例高于CD25-患者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。2.2CD25+患者与CD25-患者首次诱导完全缓解率、1年无病生存率、1年总体生存率比较CD25+患者首次诱导完全缓解率、1年无病生存率、1年总生存率均低于CD25-患者，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表2；CD25+患者与CD25-患者无病生存曲线、总体生存曲线比较见图1-2。2.3CD25+患者FLT3-ITD基因突变与预后的关系分析CD25+患者中，FLT3-ITD基因突变的患者与无FLT3-ITD基因突变的患者0.5年无病生存率和1年总体生存率比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表3。2.4CD25+患者复杂/高危核型与预后的关系分析CD25+患者中，复杂/高危核型的患者与正常/良好核型的患者无FLT3-ITD基因突变的患者0.5年无病生存率和1年总体生存率比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表4。

3讨论

AML是一组源于造血干细胞的恶性克隆性疾病，是血液系统最常见的恶性疾病，在临床和遗传学上都有高度异质性。约55%的AML患者检测出染色体异常[7]，公认的预后良好的核型包括t（15；17）、inv（16）、t（16；16）和t（8；21），少部分为预后不良核型，包括-5、-7、del（5q）、abn（3q）或复杂核型；仍有部分不能检出异常者被归为中危组，利用分子生物学方法检测某些基因突变和/或基因表达异常，有利于对AML患者作出进一步危险分层，其中因为FLT3-ITD基因突变频率较高，已被国外临床实践指南列为治疗决策的重要参考指标[8]。CD25是高度亲和IL-2的受体α链，它不能通过受体直接对髓系白血病细胞发挥生理作用，但通过与IL-2Rα有相似空间结构的IL-15Ra可替代IL-2激活Jans激酶/信号转导与转录激活子（theJanuskinase/signaltransducerandactivatoroftran-ions，JAK/STAT）和磷酸酰肌醇-3-激酶途径，从而对细胞发挥增殖调节作用[9]。有报道提出IL-2Rα基因的mRNA水平在CD25+合并BCR-ABL融合蛋白阳性（Bcr-ablfusionprotein，BCR／ABL+）的B-ALL患者中显著提高，在Ph染色体阳性的基础上，CD25+患者预后生存较CD25-患者差[10]。在AML方面，CD25亦是如此[11-12]。本研究通过对167例AML患者进行CD25抗体免疫荧光标记，结合其他相关指标回顾性分析CD25与AML的相关性，在疾病初发时的外周血象上，CD25+并不伴随显著升高的WBC和减低的PLT，而骨髓高原始幼稚细胞比例与CD25可能有关；CD25+AML患者治疗效果及生存情况明显劣于CD25-者，包括生存率和无病生存时间；因考虑到AML预后因素为多因性，那么CD25影响预后的效应是否是因为涉及到比如FLT3-ITD及不良核型的表达呢？有研究指出，CD25与FLT3-ITD基因突变具有相关性，CD25+AML患者FLT3-ITD基因突变发生率高，CD25+患者若FLT3-ITD基因突变，预后最差[13]。FLT3-ITD基因突变通过下游信号转导与转录激活子5（signaltransducerandactivatoroftran-ions5，STAT5）通路使细胞发生恶变[14]，但目前IL-2R的Jak-STAT信号传导途径与FLT3-ITD蛋白下游STAT5信号通路之间的关系尚未明确。遗憾的是，因1年无病生存的患者仅存活1例，所以对0.5年无病生存作出对比。在本研究中，CD25+患者中FLT3-ITD基因突变者及复杂/高危核型者在0.5年无病生存和1年总体生存的预后并无统计学差异，但今后需要开展更大样本量和研究时间的项目。研究指出，CD25在AML各亚型均有表达，表达情况无差异，并且与其他髓系免疫标记无相关性[11]，提示CD25表达与AML细胞的不同细胞形态学停滞阶段无关。本研究结果显示CD25表达阳性率为15.56%，各个亚型患者中均有CD25的表达，但除外M7，这可能由于样本数量过少所限，若扩大样本量研究，有望将CD25作为AML治疗后微小残留病灶监测指标，有助于巩固治疗方案和移植时机的选择。另有报道也揭示了CD25与残留病灶的关系，指出CD25的表达高低可预示移植效果，移植前CD25表达水平与移植效果呈负相关，建议对于移植前CD25仍有表达的患者做作一步的病灶清除治疗，有望提高移植成功率[15-16]。本研究存在不足之处。首先，因整体样本量还不够，CD25的表达率不高，致使各组间病例数量少，统计得出的结果还不足以支持论据，需要更进一步验证；另外，除了复杂/不良核型以及FLT3-ITD基因突变，影响AML预后的因素还有很多，本研究的关联因素和方法较为单一，多参数分析能提高结论的正确性。综上所述，CD25表达与AML患者预后不良相关。临床在患者造血干细胞移植前后行髓细胞CD25表达检测对移植效果有一定的预测意义。

作者：周淼 孙永城 王怡 盛立霞

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