摘要:目的探究孕妇与新生儿单纯疱疹病毒1型(Herpessimplexvirustype1,HSV-1)、人巨细胞病毒(Humancytomegalovirus,HCMV)以及EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)等人疱疹病毒感染情况和母婴病毒垂直传播情况。方法选取2018年4月-2019年6月于华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院进行分娩的118例单胎妊娠孕妇及对应的118例新生儿为研究对象,使用巢式PCR法检测孕妇及新生儿HSV-1、HCMV、EBV感染情况;使用酶联免疫吸附试验检测新生儿IgM和IgG阳性表达情况。结果118例孕妇中HSV-1感染率最高为27.12%(32例)、HCMV感染率为11.86%(14例)、EBV感染率为13.56%(16例);118例新生儿中EBV感染率最高为20.34%(24例);新生儿人疱疹病毒IgG阳性率均高于IgM阳性率。结论孕妇和新生儿之间存在人疱疹病毒的垂直传播情况,孕妇应加强孕期疱疹病毒的筛查并尽早注射疫苗,以降低新生儿人疱疹病毒的感染率,这对于提高新生儿生存质量和健康水平具有重要意义。

关键词:母婴;人疱疹病毒;垂直传播;免疫球蛋白

人类疱疹病毒的原发感染多发生于婴儿时期,并会在宿主体内长期潜伏,如果婴儿在成长的过程中自身免疫力下降,疱疹病毒有可能被激活从而诱发疱疹疾病[1-2]。随着研究的深入临床发现母婴传播是新生儿感染人疱疹病毒的重要途径,如果孕妇在妊娠期出现疱疹原发或复发感染,其很有可能将病毒传至婴儿,从而引起胎儿发育障碍、降低新生儿生命质量等不良情况[3-4]。因此合理控制孕妇人疱疹病毒的感染与传播对提高新生儿生命质量具有重要意义。目前发现的人疱疹病毒主要包括人单纯疱疹病毒1型(Herpessimplexvirustype1,HSV-1)、人巨细胞病毒(Humancytomegalovirus,HCMV)以及EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)等,HSV-1主要潜伏于宿主颈上神经节以及三叉神经节,如果感染有可能诱发老年痴呆、角膜炎以及脑炎等疾病,HCMV被激活主要对宿主造成损伤,而EBV则与鼻咽癌、单核细胞增多症有关[5-6]。尤其是对于新生儿而言,自身的免疫能力和抵抗能力非常脆弱,极易受到病毒的影响,严重者甚至会发生死亡[7-8]。为了降低人疱疹病毒在母婴之间的传播,降低新生儿感染概率,现研究母亲与新生儿人疱疹病毒感染的情况,旨在提供更全面有效的临床依据。

1对象与方法

1.1对象选取2018年4月-2019年6月于华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院进行分娩的118例单胎妊娠孕妇及118例新生儿为研究对象,孕妇年龄22~32岁,平均年龄(26.39±4.57)岁,孕周36-42周,平均孕周(40.29±1.87)周。新生儿中男性67例,女性51例。所有孕妇均符合以下纳入标准:(1)影像学检测为单胎妊娠。(2)无乙肝病毒、丙肝病毒、梅毒、艾滋病毒感染。(3)首次妊娠,无复发性自然流产史。(4)无造血功能异常。(5)无高危妊娠因素。(6)孕妇本人及家属均知情本实验并同意参与。所有新生儿均符合以下纳入标准:(1)无先天性心脏病、先天性肺炎等疾病。(2)出生后未进入保温箱维持生命迹象。(3)心跳、呼吸频率正常。研究经过医院伦理委员会批准。1.2方法1.2.1血液DNA提取分别抽取孕妇以及新生儿静脉血进行抗凝处理,加入500μl细胞裂解液(上海李记生物科技有限公司),12000r/min离心1min,弃上清液加入150μlPROTEINASEK-SDS缓冲液(上海李记生物科技有限公司),置于65℃下进行水浴。水浴操作10min后加入150μl异丙醇(Aladdin公司)静待出现絮状沉淀。12000r/min再次离心5min,弃上清液加入150μl70%乙醇充分震荡5秒,再次离心2min,弃上清液。将最终沉淀加入100mlTE将DNA溶解。1.2.2巢式PCR检测HSV-1内外引物PCR反应条件为94℃预变性,时间5min,94℃-58℃-72℃时间各为30s、30s、1min,热循环共30次,72℃延伸8min。HCMV内外引物PCR反应条件为94℃预变性,时间为5min,94℃-53℃-72℃时间各为30s、30s、1min,热循环共30次,72℃延伸8min。EBV内外引物PCR反应条件为94℃预变性,时间为5min,94℃-55℃-72℃-时间各为30s、30s、1min,热循环共30次,72℃延伸8min。PCR反应后使用1%琼脂凝胶电泳进行成像。1.2.3新生儿IgM和IgG检测酶联免疫吸附试验(ELSIA)检测新生儿IgM和IgG阳性表达情况,试剂盒(R&DSystems)。1.3统计分析采用SPSS13.0统计学软件对数据进行描述性统计分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,计数资料以例数和百分率表示。

2结果

2.1孕妇人疱疹病毒感染情况118例孕妇中HSV-1感染率最高,HCMV感染率最低,不同类型人疱疹病毒感染情况见表1。表1孕妇人疱疹2.2新生儿人疱疹病毒感染情况118例新生儿中EBV感染率为20.34%,感染率最高,HCMV感染率最低,不同类型感染数据见表22.3新生儿人疱疹病毒IgM和IgG检测情况新生儿HSV-1、HCMV及EBVIgG阳性率均高于IgM阳性率,不同感染类型中IgM和IgG检测阳性情况,见表3。

3讨论

人疱疹病毒是临床感染率较高的病毒之一,国内外均有研究指出人疱疹病毒在孕妇中的阳性率相对较高,有研究指出HSV-1在胎盘中的阳性率可达29.9%,也有研究指出EB病毒在30%以上的孕妇中存在再激活现象[9-10]。一旦孕妇感染人疱疹病毒,病毒很有可能通过脐血、胎盘以及母乳等途径传播至新生儿,导致新生儿感染概率增加。新生儿本不具备抵抗感染的能力,一旦感染人疱疹病毒会导致各种并发症的发生,对于新生儿的生命质量构成严重的威胁[11-12]。因此近年来研究母婴之间的人疱疹病毒的传播和控制成为临床的重要方向。张蓉等[13]研究单纯性疱疹病毒Ⅱ型母婴垂直传播初步研究,研究使用聚合酶链反应法(PCR)对574例妊娠晚期孕妇的宫颈分泌物HSV-Ⅱ型DN进行检测,用酶联免疫吸附法(ELISA)对其中的531例孕妇分娩时抽取母血及新生儿脐血HSV-Ⅱ型IgG、IgM抗体进行检测,结果发现孕妇血HSVⅡ型的IgG阳性检出率为37.48%、IgM阳性检出率为10.92%;胎儿脐血HSV-Ⅱ型的IgG阳性检出率为29.38%、IgM阳性检出率为2.64%,研究认为就单纯性疱疹病毒II型而言母婴垂直传播明显对比以往的研究发现,研究者多进行的是弓形体、风疹病毒等TORCH的母婴传播[14-16],而针对人疱疹病毒以及具体的病毒种类在母婴之间传播的研究尚在少数,因此本研究以人疱疹病毒为入手点,选取HSV-1、HCMV以及EBV3种具体疱疹病毒进行研究。研究结果发现,在孕妇HSV-1、HCMV以及EBV3种病毒均有感染的情况下,新生儿EBV感染率最高,达20.24%,HSV-1次之。EBV之所以感染率较高,原因在于EBV传播途径较广,除了能够通过脐血、胎盘等宫内传播,EBV还存在于宿主的口腔上皮细胞以及B淋巴细胞之中[17-18],因此口腔唾液传播也是EBV传播的重要途径[19-20]。新生儿感染人疱疹病毒主要分为两种,一种是先天性感染,即一出生便携带人疱疹病毒,这是由于孕妇自身感染后引起的宫内感染[21-22]。另一种则是围产期感染,主要通过母乳、唾液等方式,由于新生儿依赖母乳以及母亲咀嚼食物得以发育,因此一旦孕妇携带病毒,即便自身未感染也有可能传播至新生儿致其感染[23-24]。对新生儿人疱疹病毒IgM和IgG两种抗体进行检测发现,IgG阳性检出率高于IgM。原因在于IgG是唯一能够通过胎盘传播的抗体,因此如果孕妇携带人疱疹病毒其体内势必会产生IgM和IgG两种抗体,而IgG可以通过胎盘进入新生儿体内,使新生儿出生便携带抗体[25]。即便孕妇没有携带人疱疹病毒,其通过注射疫苗也可获得IgG抗体,因此新生儿IgG抗体水平相对较高。综上所述,孕妇和新生儿之间存在人疱疹病毒的垂直传播情况,孕妇应加强孕期疱疹病毒的筛查并尽早注射疫苗,以降低新生儿人疱疹病毒的感染率,这对于提高新生儿生存质量和健康水平具有重要意义。

作者：代莉 桂丹妮 李珍 王秋萍 赵芳 单位：华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院新生儿内科 武汉市妇女儿童医疗保健中心新生儿内科

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